Kariotipas: citogenetinis tyrimas ir jo rezultatai

Kariotipas - tai visų chromosomų, esančių kiekvienos jas turinčios somatinės ląstelės branduolyje, rinkinys, kurio skaičius ir struktūra būdingi kiekvienai rūšiai. Kariotipo testas yra citogenetinio tyrimo tipas, leidžiantis nustatyti skaičiaus (chromosomų ir skaitinių nukrypimų) ir struktūros (chromosomų struktūrinių nukrypimų) anomalijas.

Kariotipe yra visas chromosomų rinkinys, būdingas tik asmeniui. Chromosomos yra struktūros, pagamintos iš DNR ir baltymų, kiekvienoje žmogaus kūno branduolio ląstelėje yra 46 chromosomos, įskaitant 22 autosomų poras, ir 1 pora heterosomų, t. Y. Lytį lemiančios chromosomos.

Kariotipo testas yra citogenetinis testas, leidžiantis aptikti chromosomų skaičiaus (chromosomų ir skaitinių nukrypimų) ir struktūros anomalijas (chromosomų struktūrines aberacijas).

Jūsų kariotipo žinojimas yra ypač svarbus žmonėms, kurie ilgai ir nesėkmingai bando susilaukti vaikų (tokiu atveju tai turėtų padaryti abu partneriai), daug kartų persileidimus patyrusioms moterims, negyvą vaiką pagimdžiusioms moterims, taip pat žmonėms, kenčiantiems nuo genetinių ligų sukeltas chromosomų aberacijų, siekiant patvirtinti diagnozę, nustatytą remiantis fenotipiniais požymiais.

Turinys:

1. Normalus kariotipas
2. Kariotipas: tyrimo tikslas
3. Kariotipo nustatymo ir testavimo indikacijos
4. Kariotipas: tyrimo medžiaga
5. Kaip tikrinamas kariotipas?
6. Kariotipo rezultatų pristatymas
7. Kariotipas: testo laikas ir kaina

Normalus kariotipas

Normalų žmogaus kariotipą sudaro 46 chromosomos, iš kurių 23 yra paveldimos iš motinos (tai yra moteriškos lytinės ląstelės ląstelės branduolio - kiaušinio dydis) ir 23 iš tėvo (esančios lytinių ląstelių vyriškos lyties branduolyje - spermoje).

Tarp chromosomų rinkinio yra 22 autosomų poros (atsakingos už visų savybių paveldėjimą ir perdavimą, išskyrus susijusias su lytimi) ir 1 pora heterosomų (atsakingos už su lytimi susijusių funkcijų paveldėjimą).

Kariotipas apibūdinamas skaičiais, vaizduojančiais bendrą chromosomų skaičių somatinėje ląstelėje, ir didžiosiomis raidėmis X ir Y, žyminčiomis lytines chromosomas.

Normalus moters kariotipas apibūdinamas kaip 46, XX (taigi jis susideda iš 46 chromosomų, iš kurių 2 X chromosomos yra lytį lemiančios chromosomos), o normalus vyro kariotipas apibūdinamas kaip 46, XY (panašiai, jis susideda iš 46 chromosomų ir lytis yra nustatoma dviem heterosomomis - X ir Y).

Kariotipas: citogenetinio tyrimo tikslas

Atliekami citogenetiniai tyrimai ir kariotipai, siekiant patikrinti, ar paciento chromosomų skaičius ir struktūra yra teisingi. Chromosomų skaičiaus anomalijos vadinamos chromosomų aberacijomis, tarp kurių išskiriami šie:

• skaitinės chromosomų aberacijos

Normalios morfologijos chromosomų skaičiaus anomalijos dažniausiai atsiranda dėl nenormalaus ląstelių dalijimosi. Išsiskiria:

• Poliploidinės (euploidinės) ląstelės, kurioms būdingas dauginamasis dauginantis dauginimosi ląstelėms būdingas haploidinis chromosomų rinkinys (1n = 23 chromosomos), pvz., Triploidinės ląstelės (3n = 69 chromosomos; kariotipas 69, XXY), tetraploidinės (4n = 92 chromosomos; 92 kariotipas). , XXXY). Tokie nukrypimai nėra dažni, o žmonėms dažniausiai būna mirtini
  
  
• Aneuploidinės ląstelės, kurioms būdingas padidėjęs arba sumažėjęs teisingos struktūros pavienių chromosomų skaičius. Tokie nukrypimai gali paveikti tiek autosomas, tiek lytį lemiančias chromosomas. Ligos sindromų, kuriuos sukelia nenormalus chromosomų skaičius ląstelėse, pavyzdžiai:
  - monosomija - Turnerio sindromas 45, X0 (trūksta vienos lyties chromosomos)
  - trisomija - Dauno sindromas 47, XX, +21 arba 47, XY, +21 (papildoma 21 chromosoma poroje)

• Struktūrinės chromosomų aberacijos

Tai chromosomų struktūros sutrikimai, kurių skaičius somatinėje ląstelėje yra teisingas. Tarp labiausiai paplitusių yra:

• ištrynimas (chromosomos rankos fragmento praradimas)
• pasikartojimas (konkretaus chromosomos rankos fragmento padvigubinimas)
• įterpimas (papildomos kitos chromosomos fragmento įterpimas į trumpą ar ilgą chromosomos ranką)
• inversija (apverčiant chromosomos rankos dalį 180 laipsnių kampu)
• translokacija (chromosomos rankos dalies perkėlimas į kitą chromosomą)
• žiedinės chromosomos (jos susidaro suskaidžius ir sujungus vieną ar daugiau chromosomų)

Kariotipo nustatymo ir testavimo indikacijos

Citogenetiniai tyrimai ir kariotipai atliekami suaugusiesiems, pastoti bandančioms poroms, nėščioms moterims ir vaikams. Yra daug tokios diagnostikos indikacijų, ypač:

• Reprodukcijos nepakankamumas

- poros nevaisingumas (apibrėžiamas kaip nėščia nepaisant reguliaraus lytinio akto 3-4 kartus per savaitę mažiausiai vienerius metus, nenaudojant jokių kontracepcijos būdų)
- pasikartojantys persileidimai ir sunkumai išlaikant nėštumą
- negimęs
- vaiko, sergančio genetiškai nulemta liga, susijusia su chromosomų skaičiaus ar struktūros anomalijų atsiradimu, gimdymas
- tiriant kariotipą partneriuose, kurie nori apvaisinti in vitro

• Genetiška prenatalinė diagnozė nurodoma avarijos metu

- motinos (vyresnių nei 35 metų) amžius nėštumo metu
- vaiko ar brolių ar seserų chromosomų skaičiaus ar struktūros anomalijos
- nenormalūs prenatalinių tyrimų, pagrįstų neinvaziniais vaisiaus vaizdavimo ultragarsu metodais, rezultatai, kurie gali rodyti padidėjusią vaisiaus chromosomų aberacijų riziką (padidėjusi gimdos kaklelio permatomumas, nosies kaulų vystymosi sutrikimai).

• Chromosomų aberacijų sukeltų ligų diagnostika

- pacientas turi fenotipinių požymių, rodančių specifinį chromosomų sindromą arba dismorfinius požymius diagnozei patvirtinti
- chromosomų aberacijų sukeltų ligų buvimas artimoje šeimoje

• Lyties diferenciacijos sutrikimai

- nenormali išorinių lytinių organų struktūra, dėl kurios neįmanoma aiškiai nustatyti naujagimio lyties
- nėra lytinio brendimo požymių

Kariotipas: tyrimo medžiaga

Tiriamoji medžiaga paprastai yra:

• Periferinių venų limfocitai
  
  
• Amniocitai, kurie yra nušveistos vaisiaus ląstelės, randamos nėščios moters vaisiaus vandenyse. Jų tyrimas leidžia nustatyti vaisiaus kariotipą. Amniono skysčio surinkimą (amniocentezę, amniocentezę) specializuotuose centruose atlieka specialiai apmokytas ginekologas, kontroliuojamas ultragarso įrangos. Tai susideda iš punkcijos adatos įkišimo per motinos pilvo sienelę į vaisiaus vandenų ertmę ir 15–20 ml vaisiaus vandenų surinkimo. Tai invazinis tyrimas su daugeliu komplikacijų, įskaitant nėštumo praradimo riziką, dėmių iš lytinių takų atsiradimą, vaisiaus vandenų nutekėjimą, taip pat intrauterinę infekciją, intrauterinę mirtį ar dūrio adatos sužalojimą. Juos galima atlikti nuo 15 iki 20 nėštumo savaitės.
  
  
• Ląstelės, surinktos atliekant chorioninio gaurelio mėginius
  
  
• Choriono gaurelių mėginiai imami nuo 9 iki 12 nėštumo savaitės. Tai invazinis tyrimas su daugybe komplikacijų, panašus į amniocentezės testą.
  
  
• Vaisiaus kraujo ląstelės, surinktos kodrocentezės metu
  
  
• Kordocentezė, t. Y. Virkštelės pradūrimas dūrio adata, griežtai kontroliuojant ultragarsu. Jis atliekamas po 16-osios nėštumo savaitės, siekiant surinkti vaisiaus kraują tyrimui. Tai invazinis tyrimas, atliekamas retai ir yra susijęs su daugelio komplikacijų galimybe, panašiai kaip atliekant amniocentezę ir choriono gaurelių mėginius.
• Fibroblastai, gauti naudojant audinių kultūrą
  
  
• Ląstelės, gautos iš vėžinių navikų

Kaip tikrinamas kariotipas?

Išbandyti visą chromosomų rinkinį galima atlikus bet kurios branduolio turinčios kūno ląstelės tyrimą, tačiau dažniausiai naudojamas periferinio kraujo limfocitas.

Norint atlikti pagrindinį kraujo tyrimą, pavyzdžiui, išsamų kraujo tyrimą, standartiškai surenkamas nedidelio paciento veninio periferinio kraujo mėginys. Išankstinio paciento paruošimo tyrimui atlikti nereikia, jis gali būti atliekamas bet kuriuo paros metu, o pacientui nereikia būti tuščiu skrandžiu.

Norint atlikti citogenetinį tyrimą, būtina iš kraujo mėginio gauti limfocitus, slopinamus atitinkamoje ląstelių dalijimosi (mitozės) fazėje - metafazę. Tam ląstelės kultivuojamos in vitro. Naudojant ląstelių dalijimosi stimuliatorius, jie skatinami daugintis.

Ląstelėms pasiekus mitozinės metafazės stadiją, skiriama speciali medžiaga, kuri slopina dauginimosi procesą pasirinktoje mitozės fazėje. Metafazės stadijoje chromosomos yra geriausiai išsivysčiusios ir paprasčiausias būdas jas išsamiai analizuoti. Kitas kariotipo bandymo etapas yra chromosomų dažymas, siekiant gauti kiekvienai chromosomai būdingą juostos modelį.

Tuo remiantis analizatorius sugeba atpažinti atitinkamas chromosomas ir padalyti jas į homologines poras. Chromosomų skaičiaus ir struktūros analizė yra įmanoma naudojant specializuotą įrangą, tikslų šviesos mikroskopą ir kompiuterinę programinę įrangą.

Kariotipo rezultatų pristatymas

Gautas ir nudažytas chromosomas reikia atpažinti ir suskirstyti į atitinkamas homologines chromosomų poras, pažymėtas skaičiais nuo 1 iki 22. Jų identifikavimas galimas dėka išdėstytų atskirų porų juostelių, būdingų kiekvienai iš chromosomų. Heterosomos arba lytinės chromosomos pažymėtos raidėmis X ir Y.

22 porų chromosomų ir 1 autosomų grafinis pasiskirstymas vadinamas kariograma. Norėdami jį atlikti, būtina fotografuoti specialiai nudažytas chromosomas, sulaikytas mitozės metafazės stadijoje. Gautos chromosomos supjaustomos iš nuotraukų ir išdėstomos homologinėmis poromis pagal jų dydį, centromero padėtį ir juostelių raštus.

Kariotipas: testo laikas ir kaina

Paprastai atlikti citogenetinį tyrimą ir sukurti kariotipą reikia nuo 2 iki 4 savaičių, nes reikia nustatyti bandomųjų ląstelių kultūrą in vitro ir sustabdyti ląstelių dalijimąsi atitinkamame etape.

Paciento kariotipą galima nustatyti tiek privačiai citogenetinėje laboratorijoje, tiek kompensuoti Nacionaliniam sveikatos fondui.

Tyrimo, atlikto privačiomis sąlygomis, kaina svyruoja apie 500 PLN ir gali šiek tiek skirtis, priklausomai nuo laboratorijos, kurioje jis atliekamas.